時間：2023-09-11 17:36:17
CMV-IVIG;CMV感染
CMV感染是異基因HSCT術后嚴重的并發(fā)癥之一，與急性和慢性GVHD的風險增加有關。目前CMV感染的治療措施包括免疫抑制劑減量、使用抗病毒藥物和CMV特異性T細胞過繼治療等。既往系列病例報道證實大劑量 IVIG或高滴度CMV-IVIG聯合更昔洛韋治療，可提高CMV肺炎的免疫缺陷患者生存率。目前IVIG對CMV感染的治療存在爭議，2017歐洲白血病感染會議僅推薦IVIG用于治療 CMV肺炎。
遵循目前國際共識，針對CMV肺炎，推薦抗病毒藥聯合高滴度的CMV-IVIG0.15 g/kg，隔天1次，治療2周，共7次，然后每周1次，共4周；若無CMV-IVIG可用，推薦標準化的IVIG0.5g/kg，療程同CMV-IVIG。
一、靜注巨細胞病毒人免疫球蛋白體外藥效學研究
1.目的
實驗室確認靜注巨細胞病毒人免疫球蛋白（pH4）（human cytomegalovirus immunoglobulin for intravenous injection，CMV-IVIG）抑制巨細胞病毒（cytomegalovirus，CMV）感染的有效性。
2.方法
分別通過免疫熒光染色和細胞病變實驗測定CMV-IVIG抑制CMV的即早基因1表達和致細胞病變能力，確認CMV-IVIG有效性。
3.結果
即早基因1表達量與病變細胞數量隨著制品稀釋倍數的增加而增加；27倍稀釋的CMV-IVIG可抑制90.77%~95.85%的CMV感染力；103倍稀釋的CMV-IVIG可抑制＞90%的細胞病變。
4.結論
CMV-IVIG中的中和抗體能特異性中和CMV，阻止CMV感染細胞，且具有良好的量效關系。
5.正文
巨細胞病毒（cytomegalovirus，CMV）是皰疹病毒科β屬的DNA病毒，在發(fā)展中國家成年人中感染率可達100%。雖然通常呈隱性感染，但當機體免疫功能低下時，病毒可被激活而發(fā)生顯性感染。孕婦初次或復發(fā)CMV感染引起新生兒宮內感染或圍產期感染侵襲胎兒，是導致先天畸形的重要原因之一。目前尚無治療CMV感染疾病的特效藥物，由于抗CMV抗體可以保護特定人群抵抗CMV感染疾病，因此，目前使用抗病毒藥物或聯合抗病毒藥物和靜注巨細胞病毒人免疫球蛋白預防和治療CMV感染疾病。
CMV基因組復制緩慢，基因表達具有嚴格的時相性。即早基因（immediate early gene，IE）1在感染后3 h開始在細胞核中表達，6 h后即可被檢出；而CMV晚期基因的轉錄和翻譯發(fā)生在感染后的36~48 h[11]。因此，采用免疫組織化學法可使感染CMV的細胞核特異性著色。
二、具體研究過程
1.方法：
IE1表達量抑制實驗。CMV-IVIG與中和用CMV等量混和，每個濃度樣品2個復孔，37 °C、5%CO2中和1 h。然后加入MRC-5細胞于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)16~18 h。同時設陽性對照（維持液代替CMV-IVIG）和陰性對照（維持液代替CMV-IVIG和病毒）。經過細胞固定、封閉及加抗CMV IE1單克隆抗體、生物素化抗鼠IgG、親和素化鏈霉抗生物素蛋白，最后顯色。顯色后在體視顯微鏡下采集各孔圖像，用克隆計數軟件計數每孔的特異性著色細胞核。
細胞病變實驗。CMV-IVIG與同體積的CMV于37 ℃、5%CO2中和1 h后，加入 MRC-5細胞于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)48 h，設陽性對照（維持液代替CMV-IVIG）和陰性對照（維持液代替CMV-IVIG和病毒），在倒置生物顯微鏡下觀察MRC-5細胞的致細胞病變程度，記錄觀察結果。
2.結果：
IE1表達量抑制實驗結果：
同體積的不同稀釋倍數CMV-IVIG在加入相同量的CMV后，殘留病毒數不同，殘留病毒感染細胞后在細胞核內表達的IE1數量也不同，經染色后計數結果也不同。稀釋倍數越高，特異性著色的細胞核越多，即IE1表達越多。
隨著CMV-IVIG稀釋倍數的增加，降低病毒感染力的程度減小，病毒感染力增強（IE1表達越多）。在128倍稀釋度時，能降低約93%的病毒感染力，而在4096倍稀釋度時50%樣品降低病毒感染力的能力已降到0。
細胞病變實驗結果：
同體積的不同稀釋倍數的CMV-IVIG能中和的同體積病毒液中的病毒數不同，殘存的病毒導致的MRC-5細胞病變的范圍程度也不同。隨著CMV-IVIG稀釋程度的增加，相同體積樣品內含有的CMV-NA量也減少，而致細胞病變的程度增加，說明CMV-NA能特異性有效阻止CMV感染細胞，避免細胞發(fā)生病變。
3.討論：
IE1表達量抑制實驗結果中，隨著CMV-IVIG稀釋倍數的增加，相同體積樣品內含有的CMV-NA量也減少，IE1表達越多，即病毒感染力越強，CMV-IVIG 能降低病毒感染力的程度越小，在128倍稀釋時，殺滅了絕大部分病毒（平均93%），而在4096倍稀釋時50%樣品已無降低病毒感染力能力（IE1表達與陽性對照一致）。細胞病變實驗結果顯示，隨著制品稀釋程度的增加，致細胞病變的程度也在增加，說明CMV-NA能特異性有效阻止CMV感染細胞，避免細胞發(fā)生病變。
體外藥效學研究結果顯示：CMV-IVIG所含有的特異性中和抗體能有效中和病毒，阻止CMV感染細胞；中和病毒的能力與CMV-IVIG中的中和抗體含量呈正相關，具有良好的量效關系。基于上述結果，CMV-IVIG應具有相應的臨床藥效。
